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背景：

轉化生長因子(TGF)是指兩類多肽類生長因子,轉化生長因子-α和轉化生長因子-β。轉化生長因子-α是由巨噬細胞,腦細胞和表皮細胞產生,可誘導上皮發育。人類轉化生長因子－β有三個亞型,TGF-β1,TGF-β2,TGF-β3。轉化生長因子-β (Transforming growth factor beta, TGF-β)是一多功能蛋白質，可以影響多種細胞的生長，分化、細胞凋亡及免疫調節等功能。轉化生長因子-β屬于轉化生長因子-β超家族蛋白。轉化生長因子-β可以結合到細胞表面的轉化生長因子-β受體結合而激活其受體。轉化生長因子-β受體是絲/蘇激酶受體。其信號傳遞可以通過SMAD信號通路和/或DAXX信號通路。

標記：

1.將細胞培養基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標記培養基。

2.提前將2×EdU標記培養基預熱，然后將150微升2×EdU標記培養基與等體積細胞培養基混合，獲得1×EdU溶液。

【注】：①不建議替換全部培養基，這樣可能會影響細胞增殖的速度。②配置好的培養基建議現用現配，用量以沒過細胞為宜。

3.孵育細胞2 h，棄培養基。

【注】：①培養時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態。②大多數腫瘤細胞以及粘附細胞系均可采用2 h的孵育時間。

4.以1xPBS清洗細胞兩次，每次5 min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。

【注】：對于貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。

實驗步驟：

1. 將細胞以 104-105 個細胞/孔的密度接種在 96 孔板 中，加入 100μL 培養基，含或不含待測化合物。在 CO2 培養箱中在 37℃ 下培養細胞 24 小時。

2. 向板中加入 10μL 不同濃度的待測物質。

3. 在培養箱中將培養板培養適當時間（如 6、12、24 或 48 小時）。

4. 向板的每個孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要將氣泡引入孔中。

5. 將平板在培養箱中孵育 1-4 小時。

6. 在讀板之前，在定軌振蕩器上輕輕混勻。

7. 使用酶標儀測量 450nm 處的吸光度。

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